要解决AjaxControlToolkit文件上传不起作用的问题，可以尝试以下解决方法：

1. 确保已正确引用AjaxControlToolkit库。在页面的头部添加以下代码：

<%@ Register Assembly="AjaxControlToolkit" Namespace="AjaxControlToolkit" TagPrefix="ajaxToolkit" %>

2. 在页面上添加ToolkitScriptManager控件。确保页面上只有一个ToolkitScriptManager控件，并且位于所有其他控件之前。

3. 添加FileUpload控件。确保页面上有一个FileUpload控件，并且设置好相关属性。

4. 添加AsyncFileUpload控件。确保页面上有一个AsyncFileUpload控件，并且设置好相关属性。

5. 在代码-behind文件中处理文件上传事件。在Page_Load事件中添加以下代码：

protected void Page_Load(object sender, EventArgs e)
{
    AsyncFileUpload1.UploadedComplete += new EventHandler(AsyncFileUpload1_UploadedComplete);
}

protected void AsyncFileUpload1_UploadedComplete(object sender, AsyncFileUploadEventArgs e)
{
    // 处理文件上传完成后的逻辑
}

通过以上步骤，可以解决AjaxControlToolkit文件上传不起作用的问题。请根据你的具体需求和代码环境进行相应调整。